Aporte de la biología molecular en el diagnóstico de infecciones respiratorias agudas / Contribution of multiplex respiratory molecular panel to the diagnosis of acute respiratory infections

Objective: To assess the performance of multiplex-PCR for diagnosis of respiratory viruses in parallel with direct fluorescence assay (DFA). We assessed the performance and co-infection diagnosis of molecular respiratory panel PCR (MRP-PCR) and DFA in hospitalized and outpatients. Results: 8535 samples were included, 1792 tested by MRP-PCR (46.9% positive) and 6743 by DFA (35.1% positive). MRP-PCR diagnosed co-infection in 21.3% and DFA in 1.8% of the samples. Rhinovirus was the most common virus in any age group. In 210 patients both tests were done; 100 were positive by MRP-PCR and 18 by DFA. Positive concordance value was 6.2%. 85 samples were positive only by MRP-PCR and in 42 of them only novel respiratory viruses were identified. Performance of MRP-PCR was statistically significant compared DFA for traditional respiratory viruses. Discussion: Multiplex PCR has shown better sensitivity, may expand the etiologic spectrum of respiratory infections and detect a higher number of co-infections.

Objetivo: Evaluar la contribución del panel respiratorio molecular por reacción en cadena de la polimerasa-multiplex (PRM-RPC) en paralelo a la de inmunofluorescencia directa (IFD) al diagnóstico de infecciones respiratorias. Analizamos y comparamos el rendimiento y diagnóstico de co-infección de PRM-RPC con IFD en pacientes hospitalizados y ambulatorios. Resultados: Se analizaron 8535 muestras; 1792 por PRM-RPC (46,9% positivas) y 6743 por IFD (35,1% positivas). La co-infección fue 21,3% por PRM-RCP y 1,8% por IFD. El virus más frecuente fue rinovirus a toda edad. Se analizaron 210 pacientes por ambos métodos; resultaron positivas 100 por PRM-RPC y 18 por IFD, concordancia positiva de 6,2%. 85 muestras fueron solo positivas por PRM-RPC, 42 diagnosticaron nuevos virus respiratorios. El rendimiento de PRM-RPC fue significativamente mayor que el de IFD para virus respiratorios tradicionalmente diagnosticados. Conclusiones: La RCP-multiplex tiene mejor sensibilidad, podría expandir el espectro etiológico de infecciones respiratorias y detectar un mayor número de co-infecciones comparado a IFD.

Bocavirus humano en Chile: características clínicas y epidemiológicas en niños con infecciones respiratorias / Human bocavirus in Chile: clinical characteristics and epidemiological profile in children with acute respiratory tract infections

Background: Human bocavirus (HBoV) is a newly discovered parvovirus found in children with acute respiratory tract infections (ARTI). Objectives: To describe the epidemiological and clinical profile of children < 5 years old consulting for ARTI, comparing cases of HBoV monoinfection and coinfection with other known respiratory viruses. Furthermore, we aimed to estimate the prevalence of viral shedding in asymptomatic children and perform phylogenetic analysis. Patients and Methods: We investigated the presence of HBoV in nasopharyngeal secretions from children consulting for AlRTI and among asymptomatic controls, between 2007 and 2008, by polymerase chain reaction. Results: HBoV was detected in 79 (21.8 percent) of 362 nasopharyngeal swabs obtained from children with ARTI. In 60/79 (76 percent), coinfection with other respiratory viruses was confirmed. Most common symptoms were cough, fever and rhinorrhea. Children infected only with HBoV showed significantly lower frequencies of respiratory distress, oxygen requirements and hospital admission than those with coinfection. HBoV was detected in 6/16 (37.5 percent) samples from asymptomatic children. The phylogenetic analysis of viruses from Chilean patients revealed that circulating HBoV was closely related to original strains. Conclusions: HBoV was found either in symptomatic and asymptomatic children. The severity of the disease was greater when HBoV was associated to other respiratory viruses.

Introducción: Bocavirus humano (HBoV) es un nuevo parvovirus encontrado en niños con infecciones respiratorias agudas (IRA). Objetivos: Describir la epidemiología y perfil clínico en niños < 5 años con IRA, comparando aquellos con HBoV como único agente identificado, con los que tenían co-infección con otro virus respiratorio. Además se evaluó su prevalencia en niños asintomáticos, y se realizó análisis filogenético. Materiales y Métodos: Se investigó la presencia de HBoV, por medio de reacción de polimerasa en cadena, en muestras de secreción nasofaríngea obtenida en niños con IRA y en controles asintomáticos, entre 2007 y 2008. Resultados: Se detectó HBoV en 79 (21,8 por ciento) de 362 muestras obtenidas en pacientes con IRA. En 60/79 (76 por ciento), se demostró co-infección. Los síntomas más frecuentes fueron tos, fiebre y rinorrea. Los pacientes con HBoV como único agente identificado mostraron frecuencias significativamente menores de dificultad respiratoria, requerimiento de oxígeno y hospitalización, comparado con los co-infectados. HBoV se detectó en 6/16 (37,5 por ciento) muestras de niños asintomáticos. El análisis filogenético de las cepas chilenas demuestra estrecha relación con las cepas originales. Conclusiones: HBoV está presente en niños chilenos con IRA y asintomáticos. La gravedad de la enfermedad fue mayor en el grupo con co-infección.

Utilidad de la reacción de polimerasa en cadena en tiempo real en el diagnóstico de infecciones por virus respiratorio sincicial en adultos / Utility of real time polymerase chain reaction in the diagnosis of respiratory syncytial virus infection among adult patients

Introducción: Las infecciones respiratorias virales (IRV) son causa importante de morbilidad en adultos. Virus respiratorio sincicial (VRS) causa hasta 20 por ciento de las IRV en esta edad; sin embargo, su diagnóstico es subestimado debido a una menor sensibilidad de las técnicas diagnosticas convencionales (IF y ELISA). Objetivos: Evaluar el impacto del uso de reacción de la polimerasa en cadena en tiempo real (TR-RPC en tiempo real) en el diagnóstico de IRV por VRS en adultos y caracterizar su perfil clínico. Pacientes y Métodos: Durante ocho semanas del año 2005, los adultos hospitalizados en Hospital Clínico de la Universidad Católica con sospecha de IRV, e IFD negativa para VRS, FLU-A, -B, paraFLU-1, 2, 3 y ADV de muestra de hisopado nasofaríngeo, fueron sometidos a detección de VRS por TR-RPC en tiempo real. Se confeccionó una base de datos con los antecedentes clínicos, laboratorio y evolución de cada paciente. Resultados: De 114 pacientes con IFD negativa en 17 (14,9 por ciento) se detectó VRS. Fiebre, congestión faríngea, tos y signos de obstrucción bronquial, configuraron en más de 80 por ciento de los casos el perfil clínico de los pacientes. Treinta por ciento presentaba enfermedad crónica y 47 por ciento eran inmunocomprometidos. Tres de 17 (18 por ciento) presentaron descompensación de la enfermedad de base y 1/17 (6 por ciento) requirió ventilación mecánica. No hubo mortalidad asociada. Conclusiones: El uso de TR-RPC en tiempo real permitió duplicar la detección de infecciones por VRS en adultos hospitalizados respecto a las diagnosticadas por IFD. Se recomienda considerar el empleo la técnica de TR-RPC en tiempo real en aquellos pacientes con sospecha clínica de VRS durante la temporada de VRS y estudio viro lógico negativo por métodos convencionales.

Introduction: Viral respiratory infections (VRI) are a frequent cause of morbidity among adult population. Respiratory syncytial virus (RSV) produces 20 percent> of VRI, however diagnosis is limited for a low sensitivity of conventional (FDA and ELISA) tests. Aim: To assess the impact of real time reverse transcriptase-polymerase chain reaction (real time RT-PCR) technique in RSV diagnosis in adult hospitalized patients; to characterize RSV infection among these patients. Patients and Methods: All adults hospitalized in Hospital Clínico Universidad Católica during 8 weeks of winter season, with clinical picture of VRI, and with negative DFA for influenza A and B, parainfluenza 1, 2, 3 and adenovirus were included. Real time RT-PCR was performed from nasopharyngeal sample. Clinical information, general laboratory exams and chest X ray reports were collected. Results: Out of 114 patients with negative DFA, 17 (14.9 percento) Debe decir: RSV cases were demonstrated using real time RT- PCR. Fever, pharyngeal congestion, cough and bronchial obstruction were present in 80 percent> of patients. Thirty percent of them had a baseline chronic disease and 47 percent> were immunocompromised. One out of 17 patients (6 percent) required mechanical ventilation. No mortality was observed. Conclusions: Use of RT-PCR allowed increasing detection of RSV infection over 100 percent> among adults with VRI without virological diagnosis with conventional techniques. It is necessary to consider RSV RT-PCR test among patients with clinical picture of VRI during RSV season, with negative virological screening tests.

Metapneumovirus humano como causa de hospitalización en niños bajo 3 años de edad, con infección respiratoria aguda, durante el año 2004 / Human metapneumovirus as hospitalization cause in children under 3 years old with acute respiratory infections during 2004

Metapneumovirus humano (MPVh) fue detectado entre julio y noviembre en 15 de 123 niños bajo 3 años de edad hospitalizados por infección respiratoria aguda (12 por ciento). Las muestras fueron estudiadas mediante técnicas de biología molecular (RPC-TR de muestra de hisopado nasofaríngeo y/o de sobrenadante de cultivo). El 67 por ciento de los niños hospitalizados con MPVh tenían menos de 1 año de edad, todos ellos presentaron tos y fiebre y el principal motivo de hospitalización fue el requerimiento de oxígeno en 73 por ciento de los casos. Si bien un tercio de los pacientes tenía patología previa, su evolución clínica no fue diferente respecto de los niños previamente sanos. El patrón radiológico mostró aumento de la trama intersticial, con focos de consolidación en 6 casos (40 por ciento). El diagnóstico más frecuente fue síndrome bronquial obstructivo o bronquiolitis, asociado o no a neumonía. Destaca la necesidad de un método de diagnóstico rápido para optimizar el diagnóstico diferencial, manejo y control de infecciones en estos pacientes.

Human metapneumovirus was detected in 15 of 123 children (12 percent) younger than 3 years of age hospitalized for treatment of acute respiratory infection between July and November 2004. The virus was detected by RT-PCR directly from nasopharyngeal swabs and/or from supernatants after cell culture. Children infected with hMPV were mostly younger than one year of age (67 percent), all presenting with fever and cough. The main cause for hospitalization was the need for oxygen therapy (73 percent). Four hMPV positive children had an identifiable co-morbid condition but had a similar clinical evolution when compared to previously healthy infants. Chest radiography showed an increase in interstitial infiltrates with focal consolidation in 6 children. Obstructive bronchial syndrome and bronchiolitis, with or without pneumonia, were the most frequent diagnosis associated with hMPV positivity. A rapid and sensitive diagnostic method is required to improve diagnosis and treatment of these patients.

Prevalencia de anticuerpos contra Bartonella henselae en niños, en adolescentes y en una población de riesgo ocupacional en Chile / Prevalence of Bartonella henselae antibodies in Chilean children, adolescents and veterinary workers

Background: Bartonella henselae is the causative agent of cat-scratch disease. Aim: To study the seroepidemiology of Bartonella henselae in healthy Chilean children and in a population with occupational risk. Material and methods: Serum IgG antibodies were determined by indirect fluorescence technique in 181 children and adolescents and in 107 technical and professional workers involved in the care of cats. Samples with titers equal to or greater than 64 were considered positive. Results: Twenty four (13.3%) children and 11 (10.3%) occupational risk subjects were seropositive. No significant differences by age and gender were observed. Conclusions: Assuming that seroprevalence indicates level of exposure to Bartonella henselae, these results suggest that this infection is endemic in Chile and, for this reason, the best antibody titer to diagnose acute cat-scratch disease should be higher than the figure recommended by the Centers for Disease Control in the in United States.

Búsqueda de resistencia a amantadina en cepas de virus influenza A aisladas en Santiago de Chile, entre los años 2001 y 2002 / Search of amantadine-resistance in influenza A strains isolated in Santiago, Chile, 2001-2002

Amantadina es un fármaco eficaz para el tratamiento y prevención de influenza A. Su mecanismo de acción es inhibir la proteína M2. Su uso por períodos prolongados puede generar resistencia, la cual ocurre por mutaciones en el gen que codifica para la proteína M2. La mutación más frecuentemente encontrada se ubica en la posición 31. El uso de técnicas de biología molecular permite detectar estas mutaciones. Los objetivos fueron determinar la existencia de resistencia a amantadina en cepas de virus influenza A aisladas entre los años 2001 y 2002 en un laboratorio de virología en Santiago de Chile, y validar un nuevo método de biología molecular para reconocer cepas resistentes. Para ello se utilizó metodología de RPC y análisis de tamaño de fragmentos de restricción. En 31 cepas procesadas no se observó la presencia de cambios en la posición 31. Estos hallazgos sugieren que la resistencia a amantadina es muy baja o está ausente en nuestro medio. Esto podría explicarse por un limitado uso de este fármaco en esta población. El método descrito puede servir de base para un monitoreo prospectivo de resistencia, que pueda ser de utilidad al médico clínico.

Metabolismo de peróxidos en músculos respiratorios: efecto del crecimiento, desarrollo y envejecimiento / Glutathione peroxidase and catalase activity in rat respiratory muscles: effect of growth, maturation and aging

Background: Glutathione peroxidase (GSHPx) and catalase are two important cellular antioxidant enzymes involved in H2O2 and lipid-peroxide metabolism. Aim: To study the effects of growth, maturation and aging on the activity of these enzymes. Material and methods: GSHPx and catalase specific activities were measured in samples of diaphragm and intercostal muscle of male Sprague-Dawley rats of different ages (21, 50, 70, 180 and 365 days), anesthetised with chloral hydrate (45 mg/100 g ip). Results: The diaphragm and intercostal muscles did not differ in GSHPx activity at 21 days. After that, GSHPx activity increased progressively with age, but following a different pattern, in each muscle, suggesting an increase in enzyme substrates with age. In one year old animals, GSHPx activity was 5 times higher for the diaphragm and 3 times higher for the intercostal muscles, when compared with values observed at 21 days of age. Catalase activity also increased with age in the diaphragm but not in the intercostal muscles. Conclusions: GSHPx activity increases progressively with age in rat respiratory muscles, with a time course that is specific of each muscle. Catalase activity increases with age only in the diaphragm. These results support the hypothesis that antioxidants in respiratory muscles undergo specific regulatory changes with age